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細菌接種與分離方法

更新時間:2019-05-13  |  點擊率:1114


        根據待檢標本的性質、培養目的和所用培養基的種類,采用不同的接種方法。

 

        1.平板劃線分離培養法

        對混有多種細菌,采用劃線分離和培養,使原來混雜在一起的細菌沿劃線在瓊脂平板表面分離,得到分散的單個菌落,以獲得純種。平板劃線分離法通常有兩種方法:

 

        ①分區劃線分離法:此法常用于含菌量較多的細菌的分離。先用接種環挑取標本涂布于瓊脂平板1區(占培養基總面積的¼)并作數條劃線,再于2、3、4區依次劃線。每劃完一個區域,均將接種環燒灼滅菌1次,冷后再劃下一區域,每一區域的劃線均與上一區域的劃線交接1~3次。一個成功分區劃線的平板,培養后分別觀察1區形成菌苔,2區菌落連成線,3區和4區可分離到單個菌落。

 

        ②連續劃線分離法:此法常用于含菌量不多的標本或培養物中的細菌分離培養。方法是先將接種物在瓊脂平板上1/5處輕輕涂抹,然后再用接種環或拭子在平板表面曲線連續劃線接種,直至劃滿瓊脂平板表面。

 

        2.瓊脂斜面接種法

        主要用于菌落的移種,以獲得純種進行鑒定和保存菌種等。用接種環(針)挑取單個菌落或培養物,從培養基斜面底部向上劃一條直線,然后再從底部沿直線向上曲折連續劃線,直至斜面近頂端處止。生化鑒定培養基斜面接種,用接種針挑取待鑒定細菌的菌落,從斜面中央垂直刺入底部,抽出后在斜面上由下至上曲折劃線接種。

 

        3.穿刺接種法

        此法多用于半固體培養基或雙糖鐵、明膠等具有高層的培養基接種,半固體培養基的穿刺接種可用于觀察細菌的動力。接種時用接種針挑取菌落,由培養基中央垂直刺入至距管底0.4cm處,再沿穿刺線退出接種針。雙糖鐵等有高層及斜面之分的培養基,穿刺高層部分,退出接種針后直接劃線接種斜面部分。

 

        4.液體培養基接種法

        用于各種液體培養基如肉湯、蛋白胨水、糖發酵管等的接種。用接種環挑取單個菌落,傾斜液體培養管,在液面與管壁交界處研磨接種物(以試管直立后液體淹沒接種物為準)。此接種法應避免接種環與液體過多接觸,更不應在液體中混勻、攪拌,以免形成氣溶膠,造成實驗室污染。
 

        5.傾注平板法

        本法主要用于飲水、飲料、牛乳等標本中的細菌計數。取純培養物的稀釋或原標本1ml至無菌培養皿內,再將已融化并冷卻至45~50℃左右的瓊脂培養基15~20ml傾注入該無菌培養皿內,混勻,待凝固后置電熱恒溫培養箱37℃培養,長出菌落后進行菌落計數,以求出每毫升標本中所含菌數。先數6個方格(每格為1cm2)中菌落數,求出每格的平均菌落數,并算出平皿直徑,然后按下列公式計數,求出每毫升標本中的細菌數。

 

        全平板菌落數=每方格的平均菌落數×лr2

 

        每ml標本中的細菌數=全平板菌落數×稀釋倍數

 

        6.涂布接種法

        本法多用于紙片擴散法藥敏試驗的細菌接種。將一定量或適量的菌液加到瓊脂培養基表面,然后用滅菌的L型玻璃棒或棉拭子于不同的角度反復涂布,使被接種液均勻分布于瓊脂表面,然后貼上藥敏紙片,或直接培養,本法經培養后細菌形成菌苔。

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