wish細胞是上皮細胞, 人羊膜細胞 ,培養基我用的是最常見的1640(10%小牛血清,加雙抗)。
1、細胞長滿培養瓶時既要傳代。我用胰酶和edta的混合液消化。用D-Hank's液配制成0.25%的胰酶。edta的終濃度是0.02%。
2、使用前37度預熱,每個25ml培養瓶加9滴的胰酶和edta混合液,消化液的量可根據自己培養瓶的大小而定,原則就是能夠蓋滿瓶底。加入胰酶和edta混合液以后,為使酶的活性最大,將培養瓶蓋擰緊后放回培養箱中,5分鐘左右即用含血清的培養基終止消化。
如果在室溫情況下消化,時間相應加長,可以用手給培養瓶加溫,是消化液發揮最大的作用。可以在顯微鏡下觀察,當細胞界限已十分清楚,從梭形變圓,即已分離為單個細胞,且有少量細胞漂起,則要終止消化了。
3、將消化液倒掉,用eagle液洗滌一次。然后倒掉。
4、加少量1640,用吸管輕輕吹打。
5、吸1/3至1/4的細胞懸液接種至新的培養瓶,然后加8ml的新的細胞培養基,置37度5%的二氧化碳培養箱完成傳代。